Isolation von Pilzen

Begonnen von stefank, 24.Aug.18 um 19:46 Uhr

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stefank

Hallo :)
Ich bin neu in dem Thema, aber ich versuche mich gerade auch an der Aussaat von Orchideen.
Ich würde dafür gerne verschiedene Mycorrhiza selbst isolieren.
Meine ersten Versuche sind fehlgeschlagen. Es ist nichts geschimmelt (schonmal etwas), aber
in allen Petrischalen mit Orchideenwurzeln haben sich Bakterien oder Hefen breit gemacht.

Wie desinfiziert ihr eure Wurzeln? Und welche Nährböden verwendet ihr?
Klappt das ganze auch als Flüssigmyzel kultur?

Über ein par anleitungen und eure Erfahrungen würde ich mich echt sehr freuen.

Liebe Grüße
Stefan

Berthold

#1
Stefan, ich habe nur mal versucht, Pilze an Ophrys-Sämlingen zu isolieren. Darüber gibt es hier einen Thread.
https://www.orchideenkultur.net/index.php?topic=3763.0

Ich würde einen Dactylorhiza-Wurzel 10 Minuten in 3% H2O2 äusserlich desinfizieren, dann unter sterilen Bedingungen in kleine Stücke schneiden und auf Hefe-Agar Legen. Dann musst Du die Pilzarten separieren, wenn es mehrere sind.

Aber schau hier:
https://www.orchideenkultur.net/index.php?topic=2376.0
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Claus

Schau mal hier: http://www.ewetel.net/~frank.meissner2/Homepage/1987670.htm

Dr. Frank Meissner hat darüber hinaus eine ganze Abhandlung über Erdorchideen geschrieben: http://www.ewetel.net/~frank.meissner2/Homepage/index.htm

Zum Desinfizieren der Wurzeln brauchst du 30%iges H2O2. Woher du das bekommst ist nach den erfolgten Terroranschlägen aber ein Rätsel.
Wer Chemiker werden will, muss Chemie studieren; wer Jurist oder Arzt werden will, muss Jura oder Medizin studieren. Aber um Politiker zu werden, ist lediglich das Studium der eigenen Interessen notwendig. (Max O'Rell)

stefank

Super :D Vielen dank schonmal :)
Da hab ich ja bischen was zum lesen :)

An 30%ige komm ich sicher auch dran :D das sollte nich das Problem sein :D

Habt ihr schonmal versucht aus anderen in der nähe wachsenden Pflanzen Pilze zu isolieren?

Und bei den Nährböden... Macht es sinn den pH-Wert etwas anzuheben?
Viele Orchideen wachsen ja auch in kalkreicheren Böden.

Berthold

Für die Keimung würde ich immer pH 6 wählen.
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Claus

Das Problem mit den Pilzen ist, dass man zunächst meistens einen Schimmelpilz mit einfängt. Und Schimmelpilze laufen auf dem Haferagar schneller als Orchideenpilze. Somit besteht dann nicht die Möglichkeit, die in der Wachstumsfront sichtbaren Hyphenspitzen herauszunehmen und auf den nächsten Agar zu übertragen. Man muss also üben bis man nur den Orchideenpilz erwischt.

Dann stellt sich meist heraus, dass der isolierte Pilz weniger aktiv ist als die bekannten B1 und A36. Aber mit etwas Glück ...
Wer Chemiker werden will, muss Chemie studieren; wer Jurist oder Arzt werden will, muss Jura oder Medizin studieren. Aber um Politiker zu werden, ist lediglich das Studium der eigenen Interessen notwendig. (Max O'Rell)

marcel van den Berg

#6
Hello,

I am also planning to isolate fungi from terrestrial orchids. (at least give it a try)
Mostpart because of that I am not a member of de HOS, so I don't have a B1 and A36 fungus   :heul
And it would be fun is isolate a fungi that works (and hopefully germinates a lot of terrestrial orchidspecies  :-D).

I am a (relatively new) member of the VOV (hobbyist society for orchid multiplication in the Netherlands).
The only method they use at the VOV is asymbiotic, I want to go the symbiotic way.
Last year I got a lot seedlings by using the sowing on cardboard method (almost similar to the way Martijn does it).
I would like to isolate the fungi out of young protocorms, hopefully there are very few active fungi inside the plant at that stage.

So far, I have seedlings of all kinds of Dactylorhiza, Neottia ovata, Epipactis royleana, Anacamptis morio (laxiflora died), Spiranthe cernua and S. spiralis.
A friend of mine has germinated seedling of Oph. apifera, O. militaris and E. helleborine as well.

But the sowing with the cardboard technique is fairly unstable.
Sometimes it works, sometimes it doesnt, sometimes the seedling grow fast, en sometimes the seedlings stay small.
For this reason i would like to isolate the fungi.

BTW,
I'm following this forum for some years now, very informative topics and a lot of great tips!
The reason i don't react is because I can't write German, but at least I can read it (sometimes with a bit of help from G translate  :-D)

Mit freundlichen Grüßen,
Marcel van den Berg

Ralla

Hartelijk welkom, Marcel.
I have the problem the other way around, I can read dutch, but writing it is difficult.  grins
Greetings from the capital of Limburg.
Liebe Grüsse, Carola     

'Fantasie haben heißt nicht, sich etwas auszudenken, es heißt, sich aus den Dingen etwas zu machen.' - Thomas Mann

Berthold

Zitat von: marcel van den Berg am 27.Aug.18 um 11:43 Uhr
The reason i don't react is because I can't write German, but at least I can read it (sometimes with a bit of help from G translate  :-D)

Mit freundlichen Grüßen,
Marcel van den Berg

Marcel, You can write English all the time. You can be sure we will find out what You mean  :classic
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

marcel van den Berg

Ok, then i'll try to respond more often on the forum.

I have ordered some sterile perti dishes that i can use to isolate the fungi.

btw,
Somewhere on this forum (in an older topic) i have read that you cant isolate endo and ecto mycorrhizae, this is not true.
If you can provide the right nutrients, it is possible. (Told to me by an owner of an company that sells mycorrhizae for substaineble soil.)

And if you spread squashed protocorm tissue over multiple agar plates, it would possible to isolate multiple fungi in a fairly easy way. (Like: https://www.youtube.com/watch?v=l2falR7qB3Q)

Maybe i'm wrong, i have never tried it myself!

Let me know what you think about this.

Berthold

The procedure of isolating fungi is o.k.
But most time You will get a mixture of different fungi and You have to separate the mixture to get the right fungi which really can germinate the orchid.
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

marcel van den Berg

Yes, getting the right (slow growing) fungus out of a mixture can be difficult.

Maybe you can mix some of the squashed protocorm tissue with sterile water, and put droplets of the water on fresh growing medium.
In this way, you got a bigger chance of getting a pure culture.

Another way could be used if you put the sterile water ( + squashed protocorm tissue) under a microscope is look for pelotons .
If you can get the pelotons, you got a big(ger) chance that it is a pure culture for mycorrhiza.