Agar-Problem

Begonnen von Uhu, 05.Jun.12 um 21:12 Uhr

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Uhu

Seitdem der Autoklav überholt wurde hab ich Probleme mit den Nährböden. Der Agar wird einfach nicht mehr fest. Besonders oben sind die Böden fast wässrig, unten sehr fest.

Bisher hatte ich bei 1-1,5 bar über ca 45 Minuten autoklaviert. Nach Überholng hab ich Druckanstiege bis 3 bar. Auch wenn ich den Druck deutlich unter 1 bar einstelle, bekomme ich während der 45 minuten dauernden Sterilisation bis 2 bar. Zuvor konnte ich den Steri nach Abkühlen einfach öffnen. Inzwischen kann ich aufgrund eines enormen Unterdrucks die Tür anschließend nicht mehr öffnen und muss über ein Ventil zuerst einen schnellen Druckausgleich herbeiführen.

Mir ist noch nicht klar ob es allein der höhere Druck zu der Veränderung führt oder ob der rasche Vakuumausgleich den Agar nicht feste werden lässt. Was meint Ihr?
Grüße Jürgen

Matthias

Glaube nicht, Jürgen, dass dies mit dem Prozess des Autoklavierens zusammenhängt. Agar ist recht empfindlich auf unsachgemäße Lagerung. Damit haben wir manchmal Probleme. Schau mal, ob dein Agar noch in Ordnung ist.
Ich öffne auch das Ventil, um die Abkühlzeiten zu reduzieren, und es resultiert kein neg. Effekt.
Forscher haben herausgefunden ... und sind dann doch wieder hineingegangen.

Frodo

Kann es sein das Deine PH-Werte nicht stimmen, oder hast Du an den Böden sonst was verändert? Was ich mir noch vorstellen könnte ist: dass bie Böden bei 3bar einfach totgekocht sind.
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Die Halb-Wahrheit des Tages:
"Hybridizing is like doing wood sculpture with a shotgun" Ross Hella, 2008

(Gott, mein Deutsch ist schlimmer als mein English)! :ka

Berthold

Zitat von: Uhu am 05.Jun.12 um 21:12 Uhr
Nach Überholng hab ich Druckanstiege bis 3 bar.

bei 3 bar Überdruck kommst Du etwa auf 140° C. Das sollte dem Agar noch nichts anhaben können.
Ist der Agar vielleicht schon von Bakterien oder Pilzen befallen oder hat der Nährboden saure Komponeneten entwickelt, die das Vernetzen des Agars beim Erkalten verhindern?
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Uhu

Vielen Dank für eure Tips und Anregungen.

Der Agar ist in Ordnung, gute Qualität in absolut trockener Lagerung. Hat auch bis vor 3 Wochen einwandfrei funtioniert. Ansonsten hab ich nichts am Boden verändert - ist sowieso nur ein einfacher symbiotischer Schmelzflockenboden. Liegt auch nicht an zu niedrigem pH.

Ich muss wohl noch weiter probieren. Das Ventil öffne ich erst spät nach dem Abkühlen. Komme am Ende der Sterilisation meist nicht dazu, da ich am Arbeitsplatz nebenher meine Böden sterilisiere. Ich bin dann stundenlang an anderer Stelle. Ich werde den Druck weiter reduzieren und nach absinken des Überdrucks das Ventil öffnen, damit anschließend kein Unterdruck enstehen kann.
Grüße Jürgen

Berthold

Ist der Agar richtig durchmischt, bzw. bis zum Aufkochen gut gerührt?
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Claus

Zitat von: Uhu am 05.Jun.12 um 21:12 Uhr
Besonders oben sind die Böden fast wässrig, unten sehr fest.

Das deutet auf einen inhomogen gekochten Boden hin. Berthold hat das ja schon beschrieben. Hast du da etwas geändert? Der Agar löst sich ja erst bei Erreichen der 100°C wirklich auf. Du rührst doch so lange, oder?

Die 3 bar halte ich für viel zu hoch, auch deine 45 min Sterilisationszeit. Ich sterilisiere 30 min im Drucktopf, der erreicht 118°C und habe noch nie Verkeimungen des steriliseriten Bodens gehabt.

Entmischung durch die hohe Temperatur? Kann ich mir nicht vorstellen.

Hydrolyse des Agars durch die hohe Temperatur? Dann dürfte er unten nicht besonders fest sein.
Wer Chemiker werden will, muss Chemie studieren; wer Jurist oder Arzt werden will, muss Jura oder Medizin studieren. Aber um Politiker zu werden, ist lediglich das Studium der eigenen Interessen notwendig. (Max O'Rell)

Matthias

Wenn Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Bei uns hat es gereicht, am Abend eine halb Liter-Dose nicht mehr in die Kühlkammer zurückgestellt zu haben. Am nächsten Vormittag schien die Sonne drauf und das war´s dann - 9 Liter Medium wurde nicht mehr fest. Die nächste Charge auch nicht, Agar entsorgen, neue Dose auf und das Problem war gelöst. Agarlagerung: trocken - dunkel - kühl !! Und dennoch auch auf das Ablaufdatum achten. 
Forscher haben herausgefunden ... und sind dann doch wieder hineingegangen.

Berthold

Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 00:11 Uhr
Wenn Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Bei uns hat es gereicht, am Abend eine halb Liter-Dose nicht mehr in die Kühlkammer zurückgestellt zu haben. Am nächsten Vormittag schien die Sonne drauf und das war´s dann - 9 Liter Medium wurde nicht mehr fest. Die nächste Charge auch nicht, Agar entsorgen, neue Dose auf und das Problem war gelöst. Agarlagerung: trocken - dunkel - kühl !! Und dennoch auch auf das Ablaufdatum achten. 

aber in diesem Fall von Jürgen kann es eigentlich nur an schlechter Durchmischung vor dem Sterilisieren liegen.
Schlechter Agar würde unten im Glas nicht fest werden und 140° killt Agar auch nicht, da er ja unten im Glas vernetzt. Eine Entmischung bei 140° kann ich mir rein nach der Thermodynamik auch nicht vorstellen.
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Timm Willem

Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 00:11 Uhr
Wenn Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Bei uns hat es gereicht, am Abend eine halb Liter-Dose nicht mehr in die Kühlkammer zurückgestellt zu haben. Am nächsten Vormittag schien die Sonne drauf und das war´s dann - 9 Liter Medium wurde nicht mehr fest. Die nächste Charge auch nicht, Agar entsorgen, neue Dose auf und das Problem war gelöst. Agarlagerung: trocken - dunkel - kühl !! Und dennoch auch auf das Ablaufdatum achten. 
Ich habe Agar noch nie gekühlt, auch nicht in sehr großen Einheiten.

Matthias

Zitat von: Timm Willem am 06.Jun.12 um 05:05 Uhr
Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 00:11 Uhr
Wenn Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Bei uns hat es gereicht, am Abend eine halb Liter-Dose nicht mehr in die Kühlkammer zurückgestellt zu haben. Am nächsten Vormittag schien die Sonne drauf und das war´s dann - 9 Liter Medium wurde nicht mehr fest. Die nächste Charge auch nicht, Agar entsorgen, neue Dose auf und das Problem war gelöst. Agarlagerung: trocken - dunkel - kühl !! Und dennoch auch auf das Ablaufdatum achten. 
Ich habe Agar noch nie gekühlt, auch nicht in sehr großen Einheiten.

mhm, gut, dann revidiere ich das natürlich, wenn österreichisches Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Braucht wer eine Probe kaputtes Agar als Beweis? ;)
Forscher haben herausgefunden ... und sind dann doch wieder hineingegangen.

Berthold

Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 06:48 Uhr
mhm, gut, dann revidiere ich das natürlich, wenn österreichisches Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Braucht wer eine Probe kaputtes Agar als Beweis? ;)

schicke mal eine Probe in ein Bio-Labor. Nach der Theorie darf sauberer Agar nicht verderben, weil das Zeug sehr stabil ist. Deshalb kann ich mir nur vorstellen, dass Deinem Agar irgendetwas zugesetzt ist, absichtlich oder "unabsichtlich".
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Matthias

Zitat von: Berthold am 06.Jun.12 um 09:12 Uhr
Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 06:48 Uhr
mhm, gut, dann revidiere ich das natürlich, wenn österreichisches Agar verdirbt, dann passiert dies binnen Stunden. Braucht wer eine Probe kaputtes Agar als Beweis? ;)

schicke mal eine Probe in ein Bio-Labor. Nach der Theorie darf sauberer Agar nicht verderben, weil das Zeug sehr stabil ist. Deshalb kann ich mir nur vorstellen, dass Deinem Agar irgendetwas zugesetzt ist, absichtlich oder "unabsichtlich".

Wir bekommen zwar das Medium sehr entgegenkommend zur Verfügung gestellt, aber Agar will uns diese Firma (..chef.) nicht zu diesen Konditionen senden, daher verwenden wir Haushaltsagar eines südsteirischen Vertriebs, Direktimport aus Japan. Verwendet ihr Plant-Agar, Micro-Agar oder gar Phyto-Agar? 
Forscher haben herausgefunden ... und sind dann doch wieder hineingegangen.

Claus

Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 11:03 Uhr
Verwendet ihr Plant-Agar, Micro-Agar oder gar Phyto-Agar? 

Bäcker-Agar.  grins
Wer Chemiker werden will, muss Chemie studieren; wer Jurist oder Arzt werden will, muss Jura oder Medizin studieren. Aber um Politiker zu werden, ist lediglich das Studium der eigenen Interessen notwendig. (Max O'Rell)

Matthias

Zitat von: Claus am 06.Jun.12 um 11:06 Uhr
Zitat von: Matthias am 06.Jun.12 um 11:03 Uhr
Verwendet ihr Plant-Agar, Micro-Agar oder gar Phyto-Agar? 

Bäcker-Agar.  grins
Danke Bäckermeister Claus. Wir haben in unserer Backstube ähnliches.
Forscher haben herausgefunden ... und sind dann doch wieder hineingegangen.