Agar wird nach dem Sterilisieren nicht fest

Begonnen von Botanicus65, 31.Okt.15 um 12:23 Uhr

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Botanicus65

  Hallo,
gestern habe ich Nährböden gekocht und zwar Murashige & Skoog in halber Konzentratin mit Kinetin.
pro Liter:
2,2 g Nährsalze nach Murashige&Skoog
20 g Zucker
1 g Polyvinylpyrrolidon
7 g Agar Agar von hoher Reinheit
Habe alles auf dem Magnetrührer gleichmäßig erhitzt bis sich der Agar aufgelöst hat...Gelierprobe gemacht..wunderbar.
Danach im Schnellkochtopf(Sicomatic) für 25 min erhitzt auf höchster Stufe (2.Ring) ..nach dem Abkühlen war alles noch flüssig :ka und ich konnte irgendwelche ausgefallenen Partikel erkennen ,die in der Lösung schwebten.
Vom Kinetin habe ich vorher 0,025 g in 50 ml dest. H2O mit einigen Tropfen konz.H2SO4 aufgelöst und davon 1ml pro l Nährboden zugegeben...
Kann sich jemand erklären warum er nach dem Sterilisieren nicht fest wird ?
Zu lange erhitzt?

MfG Toni

Tobias TJ

Hast du den PH-Wert vorher überprüft? Ein zu saurer PH-Wert kann dazu führen,  dass der Agar nicht fest wird
Liebe Grüße,
Tobias

Botanicus65

Hallo Tobias,
danke für deine Antwort  :).Nein , ich habe den Ph-Wert vorher nicht überprüft.Danke für den Tipp! Werde mal messen gehen..und beim nächsten Mal gegebenenfalls mit Natriumhydroxid korrigieren.
Das einzige was mich stutzig macht ist,dass nur der sterilisierte Nährboden nicht fest wird,denn ich hatte noch ein paar ml übrig die ich nicht sterilisiert hatte und diese sind fest geworden.

MfG Toni

Botanicus65

Oh ja,daran wird es wohl gelegen haben.Mir sind eben fast die Augen aus dem Kopf gefallen als ich einen Ph-Wert von 3,9 abgelesen habe :weird :wacko :swoon.Woher soll ein so extremer Wert denn herkommen ?!
Doch nicht etwa von den 25 mg Kinetin die ich vorher seperat in 50 ml H2O  mit 4 Tropfen Schwefelsäure aufgelöst habe ,wovon ich NUR 1 ml in den Nährboden gegeben habe. :rofl grins grins

MfG Toni

Berthold

Man sollte etwa auf pH 6 einstellen, Toni. Wie ist der pH-Wert von der nicht sterilisierten Probe, die erstarrt ist? 
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Botanicus65

Ja werde beim nächsten mal auf 5,7 einstellen.Danke.
Der Ph-Wert des nicht sterilisierten Nährbodens ist identisch mit dem der sterilisierten Probe.

MfG Toni

Berthold

Dann kann aber der gesunkene pH-Wert allein nicht die Ursache für das Nichtgelieren sein.
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Tobias TJ

Ich denke, der niedrige pH-Wert plus hohes erhitzen durch das Sterilisieren sorgen für den Unterschied zwischen sterilisiertem und unsterilisiertem Medium...
Ich habe noch das folgende, dazu passende Zitat gefunden:

"Durch häufiges Erhitzen, besonders bei niedrigen pH-Werten, verliert Agar seine Gelierfähigkeit. Nährböden mit einem pH-Wert <5 dürfen erst nach der Sterilisation und Abkühlung (50°) auf den niedriegen Wert eingestellt werden." (Quelle: G. Drews (1974): Mikrobiologisches Praktikum; Springer Verlag)
Liebe Grüße,
Tobias

Berthold

Ist ja interessant, das wusste ich garnicht.
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)

Claus

Agar ist ähnlich Stärke und Cellulose ein Polysaccharid, d.h. er besteht aus einer Kette bzw. Netz von Zuckereinheiten. Bei Stärke und Cellulose besteht die Zuckereinheit aus Glucose (Traubenzucker), bei Agar aus Galactose.

Man sieht schon bei dem großen physikalischen Unterschied zwischen Stärke (heißwasserlöslich) und Cellulose (heißwasserunlöslich), dass die Art der Verknüpfung der Zuckereinheiten sehr wichtig ist. Beim Agar ist die Verknüpfung so, dass er praktisch heißwasserunlöslich ist.

Das gilt aber nur für einen bestimmten pH-Bereich. So wie man durch Erhitzen von Stärke oder Cellulose mit starken Säuren, z.B. Salzsäure, die Verknüpfung spalten kann und dann Glucose erhält (siehe auch Holzverzuckerung), kann man Agar in der Hitze und bei pH-Werten unterhalb 5,5 spalten = Hydrolyse). Dabei muss man gar nicht bis hinunter zur Galactose spalten, es reicht eine Verringerung des Molekulargewichts durch teilweise Spaltung der Ketten, damit der Agar nicht mehr gelieren kann.

Siehe auch: http://www.ingredientstop.co.nz/afawcs0152167/CATID=69/ID=206/SID=191830046/Agar-Agar-5kg.html

Wer Chemiker werden will, muss Chemie studieren; wer Jurist oder Arzt werden will, muss Jura oder Medizin studieren. Aber um Politiker zu werden, ist lediglich das Studium der eigenen Interessen notwendig. (Max O'Rell)

Berthold

Prima, Claus, dann stimmt die Chemie ja auch bei der Nährboden-Zubereitung.
Weniger gelobt ist genug kritisiert (frei nach Peter Altmaier)